腺病毒包裝

簡要描述：腺病毒（Adenovirus）是目前*可靠的重組病毒表達系統之一，可用于在哺乳細胞中瞬時及高水平地表達shRNA或目的蛋白。

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更新時間：2024-05-13
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產品介紹：

腺病毒（Adenovirus）是目前可靠的重組病毒表達系統之一，可用于在哺乳細胞中瞬時及高水平地表達shRNA或目的蛋白。其具備以下優點：

　　1. 宿主范圍廣。腺病毒可感染一系列哺乳動物細胞，除可感染幾乎所有人的細胞類型外，還可感染包括大鼠、小鼠、兔、豬、羊、猴、雞等物種。

　　2. 因腺病毒的感染不依賴細胞周期，故其既可以感染增殖細胞也可以感染非增殖細胞。

　　3. 腺病毒具有嗜上皮細胞特性，因大多數腫瘤細胞均屬于上皮細胞，這使得腺病毒非常適合應用于基因治療領域。

　　4. 病毒滴度高，可用于動物水平的實驗。

　　5. 有較好的生物安全性。腺病毒攜帶的基因不會整合到宿主細胞基因組中；實驗中雖然會有一定機率出現RCA（即復制型腺病毒），但由于大多數成人體內都有針對腺病毒的抗體，所以一般危害不大。

技術要點

重組腺病毒的包裝制備：重組腺病毒是從由侵染色斑組成單位（pfu）中分離獲得的。一個單色斑是線性載體質粒轉染后在20×15 cm板上由293A細胞連續侵染后被挑選和擴增形成的。重組腺病毒可通過超速離心純化，并測定滴度及進行PCR鑒定。純化后重組腺病毒的滴定濃度為1010pfu/ml，獲得的量為2-4 ml。

重組腺病毒的特性：一般的，單個腺病毒通常是在30×150mm細胞培養皿中制備的。

獲得量：1×10病毒顆粒/細胞

滴定濃度：1×1010～1×1012個病毒基因組/ml

zui終體積：1 ml純化后的病毒液（儲存于PBS）

儲存：批量儲存的*條件為-80°C

幾種病毒載體的區別：

	腺病毒表達系統	慢病毒表達系統	逆轉錄病毒
病毒基因組成	雙鏈DNA	單鏈RNA	單鏈RNA
載導容量	< 8 kb	< 8 kb	< 6kb
基因整合功能	無。病毒基因組游離于宿主基因組外，瞬時表達外源基因	有。病毒基因組整合于宿主基因組，長時間、穩定表達外源基因	有。
表達豐度	高水平表達	中	中
表達時間	快(1-2天)	慢（2-4天）	快（1-2天）
感染細胞類型	分裂和不分裂細胞	分裂和不分裂細胞。適用于難轉染細胞	感染分裂細胞，但在干細胞中表達效率低
滴度TU/ml	10^12	10^9	10^9
四環素誘導系統	不可以	TET-ON , TET-OFF	不可以
毒性作用	細胞毒性	遺傳毒性	遺傳毒性
免疫原性	高免疫原性	低免疫原性	低免疫原性
動物模型	不能得到轉基因動物	可產生轉基因動物，效率達50以上	可以，但很難
安全系數	高	高	中
能否用于MIRCORNA	可以	可以	不可以
RNAi	病毒進入細胞往往引起細胞內干擾素反應，不適合做RNAi實驗	適合，是RNAi實驗的優選工具	可以用作RNAi實驗
基因過表達	包裝容量較大。可以滿足較大基因的包裝，是過表達基因的優選工具	包裝容量有限，過表達的基因過大時，病毒滴度受到影響	包裝容量有限，過表達的基因過大時，病毒滴度受到影響
常見應用	1、體外細胞基因轉導2、基因治療	1、體外細胞基因轉導2、基因治療	體外細胞基因轉導，突變篩選，功能基因庫構建